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    伏立諾他 - 作用 - 生物活性 - 伏立諾他靶點活性

    發布時間:2018-12-17 18:07:30 編輯作者:活性小子

    伏立諾他圖片

    圖片:伏立諾他結構式

    伏立諾他,英文名伏立諾他,CAS號是149647-78-9,它是組蛋白去乙酰化酶抑制劑。伏立諾他是具有抗腫瘤活性的合成異羥肟酸衍生物。這允許異羥肟酸部分螯合位于HDAC催化袋中的鋅離子,從而抑制脫乙酰化并導致高乙酰化組蛋白和轉錄因子的積累。組蛋白的超乙酰化導致細胞周期蛋白依賴性激酶p21的上調,然后G1停滯。非組蛋白蛋白質如腫瘤抑制因子p53,α微管蛋白和熱休克蛋白90的超乙酰化產生額外的抗增殖作用。該試劑還誘導細胞凋亡并使腫瘤細胞對細胞死亡過程敏感。伏立諾他穿過血腦屏障。那么它的生物活性是什么?如何做實驗呢?下面讓小編給您詳細說明。

    首先我們介紹伏立諾他的生物活性:

    1)體外活性
    伏立諾他在治療24小時后已經以低劑量(3μM)有效抑制MES-SA細胞生長。HDAC I類(HDAC2和3)以及II類(HDAC7)優先受這種治療的影響。伏立諾他顯著增加MES-SA細胞中p21WAF1的表達和凋亡[1]。伏立諾他抑制SK-N-SH和SK-N-Be(2)C,IC25值分別為1μM和0.5μM[2]。

    伏立諾他對多種腫瘤細胞增殖具有抑制作用(包括多發性骨髓瘤,淋巴瘤,非小細胞肺癌和白血病),IC50為0.5-10μM。伏立諾他劑量依賴性地抑制兩種類型細胞增殖。通過比較伏立諾他作用于一組細胞系–正常人非纖維細胞(WI-38)和 SV40巨大T抗原轉化WI-38(VA-13細胞)發現,除抑制轉化細胞增殖外, 伏立諾他對正常細胞增殖也有抑制作用。但伏立諾他對腫瘤細胞具有選擇毒性,使腫瘤細胞死亡,但只抑制正常細胞不會使其死亡。伏立諾他抑制腫瘤細胞生長,包括NB4(IC50:0.7μM), H460(IC50:3.4 μM) 和HCT-116(IC50:1.2 μM)。

    伏立諾他抑制HDAC活性,包括乙酰化組蛋白和非組蛋白的積累,從而抑制培養細胞的增殖和腫瘤生長。和5-aza聯用相比,伏立諾他和Genistein聯用對細胞死亡的誘導效果要高很多。伏立諾他和Genistein聯用可使ARCaP-E增殖降低 80 %,使ARCaP-M細胞增殖降低60 %以上。Genistein和伏立諾他聯用對細胞增殖的抑制作用具有協同效應。作用于ARCaP-E 細胞(820個基因 誘導和1046個基因抑制) 和ARCaP-M 細胞時,與Genistein相比伏立諾他影響的基因更多。

    作用于腫瘤細胞表面,伏立諾他劑量依賴性提高Fas蛋白水平,且以0.75 μM處理時提高達到一個穩定水平。作用于淋巴瘤和白血病細胞,包括 Burkitt, B-細胞急性淋巴細胞白血病 (B-ALL), MCL, DLBCL, ATL和T-細胞,Vorinosta對細胞增殖有不同程度的抑制作用。

    2)體內活性
    在注射5×106 MES-SA細胞的裸鼠中,伏立諾他(50 mg / kg /天)可使腫瘤生長減少50%以上[1]。伏立諾他和Decitabinet聯用可增強腫瘤衰退的效果。在未處理時,野生型和Fasgld 小鼠中在肺腫瘤負擔方面的區別并不明顯。但與處理Fasgld小鼠相比,伏立諾他和Decitabinet聯用處理野生型小鼠的腫瘤衰退效果要高很多。伏立諾他和Decitabinet使結腸癌細胞對FasL調節的腫瘤衰退敏感。伏立諾他和Decitabinet低劑量處理時無明顯肝臟毒性。

    我們已經了解了伏立諾他的生物活性,接下來如何做活性實驗呢?一般來說,有如下的三種方法:

    1)細胞實驗
    通過使用RIPA緩沖液(25mM Tris-HCl pH 7.6,150mM NaCl,1%NP-40,1%脫氧膽酸鈉,0.1%SDS)制備細胞裂解物,并通過Bio-Rad DC蛋白質測定法測定蛋白質濃度。通過SDS-PAGE分離蛋白質裂解物并轉移至硝酸纖維素膜。使用以下抗體和稀釋液:兔抗HDAC1(1μg/ mL); 兔抗HDAC2(1μg/ mL); 兔抗HDAC3(9μg/ mL); 兔抗HDAC7(3μg/ mL); 小鼠抗p21WAF1(0.5μg/ mL)。作為二抗,兔抗小鼠和豬抗兔HRP偶聯抗體的終濃度為1μg/ mL。在4℃下過夜孵育用于所有一抗,然后洗滌并在室溫下用二抗孵育2小時。通過增強的化學發光測定使特異性蛋白質條帶可視化。為了證明蛋白質樣品的等量加載,所有蛋白質印跡都被探測β-微管蛋白。

    2)動物實驗
    用異氟醚麻醉12周齡雄性小鼠(n = 14),并將5×106個MES-SA細胞皮下注射到動物的右側腹中。來自對照組的小鼠接受含有300μL空HOP-β-CD(2-羥丙基-β-環糊精)囊泡的安慰劑。另一組小鼠接受溶解于HOP-β-CD中的伏立諾他,濃度為50mg / kg /天。從注射MES-SA腫瘤細胞后第4天開始腹膜內施用空囊泡和伏立諾他。每周兩次估計小鼠體重和腫瘤大小(w2×l×0.52;通過卡尺測量)。將所有小鼠治療21天,然后通過頸椎脫位處死。將每個腫瘤作為整體分離,并確定不同的腫瘤參數。最后,將腫瘤切片冷凍保存并將福爾馬林固定(4%)用于進一步分析。

    3)激酶實驗
    免疫沉淀-HDAC測定:將Jurkat細胞的裂解物在冰上溫育1小時,并通過在4℃以12,000g離心10分鐘來澄清。將上清液用30μL50%蛋白質G-Sepharose漿液在4℃下預清洗1小時。通過離心沉淀珠粒,并將上清液在4℃下與來自抗HDAC1或HDAC3多克隆抗血清的10μgIgG級分孵育1小時(在室溫下與同源或異源免疫肽預孵育2小時)。通過使用與匙孔血藍蛋白偶聯的合成肽,在兔中產生兩種抗血清以抵抗HDAC1和HDAC3的羧基末端肽。在4℃下加入30μL50%蛋白質G-Sepharose漿液1小時。通過離心沉淀免疫復合物,并用1mL裂解緩沖液洗滌三次。將珠子重懸于200μLHDAC緩沖液(20mM Tris-HCl,pH 8.0 / 150mM NaCl / 10%甘油)中,并用對應于組蛋白H4的氨基酸1-24的3H-乙酰化肽進行HDAC測定。通過閃爍計數定量釋放的[3 H]乙酸。對于抑制研究,將免疫沉淀的復合物與不同濃度的伏立諾他在4℃下預孵育30分鐘。

    今天介紹了伏立諾他的作用,并且詳細地說明了它的生物活性和實驗方法。綜上所述,伏立諾他Vorinostat是一種有效的,可口服的 HDAC1,HDAC2,HDAC3 (Class I),HDAC7 (Class II) 和 Class IV (HDAC11) 的抑制劑,對 HDAC1/3 的 ID50 值分別為 10 nM 和 20 nM。它的靶點活性是HDAC,~10nM;HDAC1;HDAC2;HDAC3;HDAC6;HDAC8。

    您可能想了解伏立諾他的物理化學性質http://www.nd919.com/cas/149647-78-9_323098.html。如果您有其他資訊方面的需求,請和化源網聯系。

    參考文獻:
    1. Richon VM, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 1998, 95(6), 3003-3007.
    2. Butler LM, et al. Cancer Res, 2000, 60(18), 5165-5170.
    3. Munster PN, et al. Cancer Res, 2001, 61(23), 8492-8497.
    4. Hockly E, et al. Natl Acad Sci U S A, 2003, 100(4), 2041-2046.
    5. Mitsiades CS, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2004, 101(2), 540-545.
    6. Pei XY, et al. Clin Cancer Res, 2004, 10(11), 3839-3852.
    7. Zhang G, et al. Clin Cancer Res, 2008, 14(17), 5385-5399.
    8. Dai Y, et al. Blood, 2008, 112(3), 793-804.

    相關化合物:伏立諾他

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